Aula_1_Introduo__Microscopia (2)

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MICROSCOPIA
Prof. Dr. Wellington Nascimento
Dimensões das células
Macroscópicas:
Gema do ovoAlvéolos da laranja Óvulo humano = cerca de 0,01 mm
Microscópicas:
ProtozoáriosBactérias Alguns Fungos
1 m
1 m/100 (0,01) = 10-2 m = 1 cm
1 m/1.000 (0,001) = 10-3 m = 1 mm 
1/1.000.000 m = (0,000001 m) = 10-6 m = 1 µm (Micrômetro) 
1/1.000.000.000 m (0,000000001 m) = 10-9 m = 1 nm (Nanômetro) 
1/10.000.000.000 m (0,0000000001 m) = 10-10 m = 1 Ǻ (Ǻngström)
1/1.000.000.000.000 m (0,000000000001 m) = 10-12 m = 1 p (Picômetro)
MICROSCOPIA: Conjunto de técnicas que permite obter imagens 
ampliadas de estruturas, a partir da utilização do microscópio. 
.
formigapontoátomos
Os microscópios dividem-se em duas categorias:
➢ Microscópio óptico: Feixe de luz;
 Aumenta até 1 000 vezes;
 Limite resolutivo de até 0,2 µm. 
➢ Microscópio eletrônico: Feixes de elétrons;
 Aumenta 1 milhão de vezes;
 Limite resolutivo de cerca de 2 nm.
 
Microscópio
Microscópio óptico
Compõe-se de uma parte mecânica, que serve de suporte, e uma parte óptica, 
constituída por três sistemas de lentes: o condensador, a objetiva e a ocular.
Pinça
Base
Três sistemas de lentes: o condensador projeta um cone de luz sobre as células que 
estão sendo examinadas. Após atravessar as células, esse feixe luminoso penetra na 
objetiva, a qual projeta uma imagem aumentada no plano focal da ocular, que, 
novamente a amplia. A imagem fornecida pela ocular é percebida pela retina.
Células, tecidos etc.
Poder de Resolução
Poder de resolução – É a capacidade de separar detalhes. 
Na prática, o poder de resolução é expresso pelo Limite de resolução, que é a 
menor distância que deve existir entre dois pontos para que eles apareçam 
individualizados no microscópio.
O limite de resolução (LR) da objetiva é fornecido pela fórmula:
 
 
Pra pensar!!! 
Duas estruturas biológicas separadas por 0,3 µm aparecem individualizadas quando 
examinadas em um microscópio óptico com limite resolutivo de 0,5 µm?
0,3 µm 
LR = 0,5 µm NÃO!!!
Pra pensar!!! 
Duas estruturas biológicas separadas por 0,3 µm aparecem individualizadas quando 
examinadas em um microscópio óptico com limite resolutivo de 0,2 µm?
0,3 µm 
LR = 0,2 µm SIM!!!
Preparação das lâminas
• Lâminas na qual as células ficam preservadas, isto é fixadas e coradas, 
para melhor demonstração dos seus componentes.
FIXAÇÃO
O formaldeído e o glutaraldeído são os fixadores mais utilizados.
É a primeira etapa e apresenta as seguintes finalidades:
• Impedir a atividade e a proliferação de bactérias e fungos;
• Evitar a autólise (destruição da célula por suas próprias enzimas);
 
Formaldeído
Microtomia
• Em sua maioria, as células fazem parte de tecidos que precisam ser 
cortados em fatias finas para exame no microscópio. Esses cortes são feitos 
em um micrótomo. Para ser cortado no micrótomo, o fragmento de tecido 
fixado é geralmente imerso em parafina ou em resinas plásticas 
especiais.
COLORAÇÃO
• Os corantes básicos combinam-se com os grupamentos ácidos das 
moléculas celulares (DNA e RNA). Ex: hematoxilina.
• Os corantes ácidos tendem a se combinarem com os componentes 
celulares básicos (proteínas citoplasmáticas). Ex: eosina, orange G e 
fucsina.
MICROSCÓPIO DE CONTRASTE DE FASE
É dotado de um sistema óptico que transforma diferenças de fase dos raios 
luminosos em diferenças de intensidade. Aqui as estruturas celulares aparecem 
escuras (fase positiva) ou claras (fase negativa).
As diversas estruturas celulares apresentam quantidades diversas de matéria e 
causam atrasos diferentes na luz que as atravessa. Isso provoca diferenças de 
fase na luz emergente que são transformadas em diferenças de intensidade 
luminosa. É empregado, em especial, para o estudo de células vivas.
Imagem de fibroblasto em microscopia de contraste de fase. 
MICROSCÓPIO CONFOCAL
A iluminação é feita por um feixe de raios laser, que varre o corte iluminando 
ponto por ponto, em um determinado plano da célula. 
Geralmente, as células são submetidas a um composto fluorescente. 
Aqui pode se construir a imagem tridimensional ou calcular o 
comprimento, área e volume do material biológico.
Células de embrião de inseto
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE TRANSMISSÃO
Emprega feixes de elétrons, que acelerados por uma diferença de potencial de 
60 000 volts, apresentam um comprimento de onda de 0,005 nm, dando um 
maior poder resolutivo a este microscópio.
Pode-se observar vírus e organelas isoladas.
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE VARREDURA
Também usa feixe de elétrons, mas fornece imagens tridimensionais, pelo exame 
da superfície das estruturas.
Pode resolver detalhes entre 3nm e 20 nm.
Atividade 1:
Quais são os seres representados em escala microscópica?
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Atividade 2: Identifique as partes do microscópio óptico
1. Discuta as vantagens e desvantagens da microscopia óptica e 
eletrônica. 
2. Como você poderia visualizar melhor (a) uma célula viva da 
pele, (b) uma mitocôndria de levedura, (c) uma bactéria e (d) 
um microtúbulo?
Atividade 3: Discussão
RESPOSTAS
Questão 1:
• A microscopia óptica é muito mais fácil de ser utilizada e requer instrumentos muito 
mais simples. Objetos que têm 1 μm de tamanho podem ser facilmente visualizados; o 
menor limite de resolução é de 0,2 μm, que é um limite teórico imposto pelo 
comprimento de onda da luz visível. A luz visível não é destrutiva e passa prontamente 
através da água, tornando possível observar células vivas. 
• A microscopia eletrônica, por outro lado, é muito mais complicada, tanto na natureza 
do instrumento como na preparação da amostra (que necessita ser cortada muito fina, 
corada com metal pesado elétron-denso e completamente desidratada). 
Questão 2:
• As células vivas não podem ser observadas em um microscópio eletrônico. No entanto, 
a resolução da microscopia eletrônica é muito mais alta, e objetos tão pequenos quanto 
10 nm podem ser facilmente resolvidos. Para observar qualquer detalhe estrutural, 
microtúbulos, mitocôndrias e bactérias deveriam ser analisadas por microscopia 
eletrônica. No entanto, é possível corá-los com corantes específicos e então determinar 
a sua localização por microscopia óptica.
Atividade 4: Pesquisar sobre a história do microscópio.
	Slide 1: MICROSCOPIA
	Slide 2
	Slide 3
	Slide 4: Microscópio
	Slide 5: Microscópio óptico
	Slide 6
	Slide 7
	Slide 8
	Slide 9
	Slide 10: Preparação das lâminas
	Slide 11
	Slide 12: Microtomia
	Slide 13
	Slide 14
	Slide 15: MICROSCÓPIO DE CONTRASTE DE FASE
	Slide 16: MICROSCÓPIO CONFOCAL
	Slide 17: MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE TRANSMISSÃO
	Slide 18: MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE VARREDURA
	Slide 19
	Slide 20
	Slide 21
	Slide 22
	Slide 23